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                  实验指南

                  EXPERIMENT GUIDE
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                    透射电镜&扫描电镜送样注意事项

                    透射电镜收样要求

                    一、组织样本:

                    (1)    组织固定,体积尽可能小,一般要求1 mm3大小,如果容易漂浮的组织样本,在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中,组织太大固定不充分,容易造成照片模糊或者结构溶解。

                    (2)    组织取材要迅速干脆,在几分钟内保存于戊二醛,保持结构完整性。

                    (3)    组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验,不要存放太长时间。

                    (4)    部分组织需要在电镜时定位,需要加收定位费,常规组织定位如:肾脏观察肾小球变化,肺组织观察特殊的细胞结构,脑组织定位CA1、CA2、CA3结构等。


                    二、细胞样本:

                            样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验,一般要求细胞量106以上。

                    (1)    贴壁细胞:弃去培养基,PBS洗涤3次,每孔加入1 mL 2.5%戊二醛固定1-1.5 h,固定完毕后,细胞刮轻柔的将细胞刮下,收集至1.5 mL离心管内,取5 μL在显微镜下观察细胞是否刮碎,如果细胞完整,则1000 rpm离心5 min收集细胞,加入1 mL新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4度避光保存,一般保存1周进行实验。

                    (2)    悬浮细胞:细胞离心收集后,加1 mL 2.5%戊二醛混匀固定,4度避光保存。


                    三、微泡&外泌体

                            客户需要将微泡&外泌体分离出来,2.5%戊二醛重悬固定,2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可,保证微泡&外泌体的浓度便于观察寻找。


                    扫描电镜收样要求

                    一、组织样本:

                            观察面朝上固定于支持物或者观察面朝上放置于管内(管状组织需要新鲜时切面剖开内面朝外固定于支持物)。


                    二、细胞样本:

                    (1)    贴壁细胞:细胞需要接在爬片上,爬片直径在1 cm以内,2.5%戊二醛固定,正面朝上,切勿将有细胞一面放反。

                    (2)    悬浮细胞:细胞离心收集后,直接固定,扫描电镜老师自己制备在支持物上。


                    三、微泡&外泌体

                            客户需要将微泡&外泌体分离出来,2.5%戊二醛重悬固定,离心后的需要肉眼可见的量才可检测,外泌体如果直径太小,无法观察,一般观察200 nm-1000 nm左右,常规可观察微泡。

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