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                  实验指南

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                    realtime PCR样本收集注意事项


                    细胞 (收细胞之前确认上清是否需要留)

                    (1)    贴壁细胞

                            吸掉培养基,PBS洗一次,吸掉PBS,加入1 mL  Trizol,将底部细胞吹打起来,转入1.5 mLEP管,裂解细胞,-80度冻存,干冰运输。

                    (2)    悬浮细胞

                            将培养基及细胞转入1.5 mL EP管,5000转3 min离心,离心后吸掉上清,加入1 mL  Trizol,吹打混匀,裂解细胞,-80度冻存,干冰运输。

                    (3)     贴壁细胞和悬浮细胞混合

                            将底部细胞吹打起来,转入1.5 mL EP管,5000转3 min离心,离心后吸掉上清,加入1 mL  Trizol,吹打混匀,裂解细胞,-80度冻存,干冰运输。


                    组织

                            请提供不低于100 mg组织样本,-80度冻存,干冰运输。


                    血清、血浆

                            血清或者血浆游离RNA的提取,需首先按照常规方法分离血清或者血浆(采血后24 h内分离),按照比例加入专用Trizol,推荐使用Invitrogen公司TRIzol? LS Reagent,-80度冻存,干冰运输。


                    全血

                            1:3加入1×红细胞裂解液,裂解10 min,12000转3 min离心,倒掉废液,沉淀下来的外周血单个核细胞加入1mL  Trizol,吹打混匀,-80度冻存,干冰运输。


                    尿液

                            按照比例加入专用 Trizol,推荐使用Invitrogen公司TRIzol? LS Reagent,-80度冻存,干冰运输。


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